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警惕細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的『隱形刺客』

更新時(shí)間:2023-04-01  |  點(diǎn)擊率:442

毒素(Endotoxin)是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的結(jié)構(gòu),又被稱為脂多糖或者“熱源",是由菌體裂解后釋出的毒素,單位EU/ml。內(nèi)毒素耐熱,曾有人做過(guò)實(shí)驗(yàn),在100℃的高溫下加熱內(nèi)毒素1小時(shí),也不會(huì)破壞其結(jié)構(gòu)。

細(xì)胞培養(yǎng)中,培養(yǎng)體系中可能會(huì)收到內(nèi)毒素的干擾。生物實(shí)驗(yàn)室中,內(nèi)毒素主要來(lái)自于各類配試劑所用的水、各類培養(yǎng)基、血清及其他添加劑、實(shí)驗(yàn)器皿表面等。

內(nèi)毒素更像是一個(gè)“隱形的刺客",日常實(shí)驗(yàn)中不顯山露水,關(guān)鍵時(shí)刻很可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成“致命一擊",導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差,影響實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性。


內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞的的影響

培養(yǎng)體系中的內(nèi)毒素侵染細(xì)胞后,會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖,可能會(huì)引起細(xì)胞型態(tài)的改變,導(dǎo)致細(xì)胞收縮;也可能會(huì)引發(fā)細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致信號(hào)通路的改變;還有可能影響蛋白的表達(dá)調(diào)控。

此前,有人做過(guò)實(shí)驗(yàn),來(lái)觀察內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響,記錄的影響包括:刺激白細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生組織因子、激活鼠巨噬細(xì)胞,以及通過(guò)低水平的內(nèi)毒素抑制鼠類紅細(xì)胞集落形成等一系列指標(biāo)。

從現(xiàn)有的研究可以看出,內(nèi)毒素對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)影響還是很大的:改變細(xì)胞外形、活化細(xì)胞、產(chǎn)生訊息傳遞物質(zhì)、抑制酶活性、抑制人工受精的成功率等。

血清中內(nèi)毒素含量過(guò)高,更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康",造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn),或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。所以要盡量選擇內(nèi)毒素低的血清。

Ausbian血清

血清可能會(huì)成為細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,內(nèi)毒素的來(lái)源,因此,在選擇血清時(shí),要重點(diǎn)關(guān)注內(nèi)毒素指標(biāo)。


以下幾類情況更應(yīng)關(guān)注內(nèi)毒素的影響:

1、養(yǎng)干細(xì)胞時(shí),干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí),干細(xì)胞很容易死亡。

2、養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí),過(guò)高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。

3、基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會(huì)讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,謬以千里"。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí),選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。

4、原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染,或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增,這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。

5、實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞,需要長(zhǎng)期培養(yǎng)、長(zhǎng)期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會(huì)經(jīng)?;蜷L(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)久對(duì)細(xì)胞的毒性影響。


Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,所有血清出廠前,均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控,每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》,對(duì)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)及含量有明確的標(biāo)識(shí),精選內(nèi)毒素≤3EU/ml的批次,降低對(duì)細(xì)胞的影響。



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