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如何高效培養(yǎng)細(xì)胞——無(wú)菌環(huán)境的控制

更新時(shí)間:2022-12-09  |  點(diǎn)擊率:642

常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)物污染主要分為化學(xué)污染與生物污染。

生物污染

細(xì)菌污染:

在生物污染中,細(xì)菌污染更為常見(jiàn)。特點(diǎn)就是:發(fā)生迅速、容易觀察。一般發(fā)生細(xì)菌污染后幾天內(nèi),就能肉眼觀察到;可肉眼觀察到培養(yǎng)物變渾濁,有時(shí)可觀察到明顯顆粒物,液體表面可能會(huì)形成一層薄膜。

真菌污染:

酵母菌、霉菌是真菌污染中常見(jiàn)的兩類(lèi)。污染初期,培養(yǎng)基pH均不會(huì)有明顯變化,后期會(huì)伴隨pH的升高,培養(yǎng)物會(huì)變得混濁,顯微鏡下觀察,酵母菌污染會(huì)有橢球形或球形顆粒,而霉菌污染則能看到明顯菌絲。

支原體污染:

支原體非常小,光學(xué)顯微鏡下難以檢測(cè),污染前期也很難看到明顯現(xiàn)象。當(dāng)支原體密度高到一定程度后,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物“變質(zhì)":pH驟變引起培養(yǎng)基快速變黃等。一些生長(zhǎng)緩慢的支原體可在培養(yǎng)物中持續(xù)存活,而不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡,但支原體污染的細(xì)胞,通常行為和代謝都會(huì)發(fā)生改變,進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

病毒污染:

病毒可以利用宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)進(jìn)行繁殖。體積小,檢測(cè)及祛除的難度都比較大。雖然大多數(shù)病毒對(duì)宿主的要求都比較嚴(yán)格,通常不會(huì)對(duì)宿主以外物種及細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生不良影響,但對(duì)被病毒感染的細(xì)胞本身會(huì)產(chǎn)生比較大的威脅。因此,實(shí)驗(yàn)時(shí),要選擇來(lái)源正規(guī)的細(xì)胞株,實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,也要注意無(wú)菌操作,預(yù)防污染。

細(xì)胞交叉污染

不同細(xì)胞共同培養(yǎng)在一個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi),就會(huì)形成交叉污染。需要通過(guò)合格的細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)渠道,以及嚴(yán)格規(guī)范的操作流程規(guī)避該問(wèn)題。

化學(xué)污染

一些外源化學(xué)物質(zhì),如:用過(guò)的器具未清洗干凈,使用的添加劑純度不達(dá)標(biāo)等等。都會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生或大或小的影響,此類(lèi)影響可能抑制細(xì)胞生長(zhǎng),也可能加速細(xì)胞生長(zhǎng),但這些都是不可控的。

因此,在挑選試劑時(shí),要購(gòu)買(mǎi)在正規(guī)產(chǎn)品,盡量使用一次性滅菌器具,注意實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范。

創(chuàng)造無(wú)菌培養(yǎng)環(huán)境

細(xì)胞一旦發(fā)生污染,多數(shù)情況下都不可再繼續(xù)使用,即便是使用祛除試劑,也會(huì)造成不可避免的經(jīng)濟(jì)成本和時(shí)間成本。

因此,為細(xì)胞創(chuàng)造一個(gè)無(wú)菌環(huán)境就顯得尤為重要。對(duì)于環(huán)境的清潔、消毒、滅菌,以高效、便捷、安全為基本原則。

日常清潔可選用新捷爾滅這類(lèi)試劑,定期(每周1-2次)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)室的墻壁、桌面、地面進(jìn)行噴灑、擦拭處理,同時(shí)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)房間專(zhuān)用的實(shí)驗(yàn)服等物品進(jìn)行清洗、滅菌處理。

除此之外,推薦使用支原體祛除試劑,對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期維護(hù)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

(1)快速有效

噴霧劑中含有支原體專(zhuān)用殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。

(2)廣譜抗菌

不僅能祛除支原體,而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

(3)無(wú)腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑,無(wú)腐蝕性和致癌性成分

(4)操作簡(jiǎn)便

即用型消毒液,可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區(qū)的清潔干凈


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