劃痕實驗:
也叫創(chuàng)傷愈合實驗,是一種簡單快捷的測定細(xì)胞遷移運動與修復(fù)能力的方法。
檢測原理:
在體外培養(yǎng)條件下,在培養(yǎng)皿中的單層貼壁細(xì)胞上,用微量槍頭或其它無菌的硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線,用以去除中央部分的細(xì)胞,然后按照實驗設(shè)定的時間(36h、72h等),繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。取出細(xì)胞培養(yǎng)板,觀察周邊細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū),以此判斷細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū),進(jìn)而判斷細(xì)胞的生長遷移能力。
實驗通常還需設(shè)定正常對照組和實驗組,實驗組往往是加了某種處理因素、藥物或外源性基因等,通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力,來判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
用途:
可以用來確定貼壁細(xì)胞的遷移速率。
特點:
簡捷、成本低、實驗結(jié)果直觀。但測量適用的細(xì)胞范圍較小,一般只適用于上皮細(xì)胞,纖維樣細(xì)胞。
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血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:
提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
起酸堿度緩沖液作用。
提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
參與細(xì)胞凍存。
......
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